PBS 缓冲液全称磷酸盐缓冲生理盐水，是生物实验最常用缓冲体系，常规 0.01M pH7.4 版本，核心作用是维持等渗环境与稳定 pH，常用于细胞漂洗 免疫染色 蛋白实验，配制核心就是称量四种试剂，溶解之后调 pH，定容，再高压灭菌，整个流程重点控制 pH、渗透压和无菌状态，很多新手容易出现 pH 偏差、盐称量错误，导致后续细胞实验失败。

1×PBS 标准配方（1L，pH7.4，0.01M）

说明：如果使用十二水合磷酸氢二钠 Na₂HPO₄・12H₂O，称量质量改为 3.62 g，这点非常关键，结晶水版本和无水物质量不能混用。

配制操作步骤

第一步 准备容器，取 1L 干净烧杯，加入约 800 mL 去离子水

第二步 按上表依次称取 NaCl、KCl、Na₂HPO₄、KH₂PO₄，全部加入烧杯

第三步 磁力搅拌，搅拌至试剂完全溶解，没有固体沉淀

第四步 使用 pH 计，滴加稀盐酸或者稀 NaOH，把溶液 pH 调节到 7.4

第五步 将溶液转移至 1L 容量瓶，用去离子水定容至刻度线，混匀

第六步 根据实验需求选择灭菌方式，细胞类实验推荐 121℃高压蒸汽灭菌 20 min；普通洗涤用可以过滤除菌

第七步 冷却之后密封保存，常温或者 4℃冷藏备用

10×PBS 浓缩液配制要点

10× 是十倍浓缩储液，试剂全部乘以 10，优点是节省储存空间，使用前用去离子水稀释成 1×，稀释之后一定要重新复测 pH，浓缩液稀释后 pH 容易发生偏移。

关键注意事项

1 pH 必须在室温下测定，高温会改变 pH 读数，高压灭菌之后 pH 也会轻微变化

2 必须使用去离子水，不要用自来水，自来水中杂质离子会干扰实验

3 配制完成如果出现浑浊沉淀，说明试剂变质或者称量错误，不能继续使用

4 细胞培养用 PBS 不能添加钙镁离子，如果需要含 Ca²+ Mg²+ 版本，配方要单独调整，普通 PBS 是无钙镁版本

5 储存尽量密封，防止水分蒸发造成盐浓度升高，渗透压改变

常见问题排查

• pH 偏低：磷酸二氢钾占比偏高，补加 NaOH 微调
• pH 偏高：补加稀盐酸微调
• 渗透压异常：定容错误，或者结晶水试剂换算出错

【常见问题】

问题 1 PBS 缓冲液配制为什么区分无水和十二水合磷酸氢二钠

回答 1 PBS 缓冲液配制的时候，Na₂HPO₄有无水和十二水合物两种，二者分子量不同，PBS 缓冲液配制称量质量必须换算，直接照搬质量会造成浓度错误。

问题 2 PBS 缓冲液配制之后一定要高压灭菌吗

回答 1 PBS 缓冲液配制之后，细胞相关实验建议高压灭菌，普通组织洗涤实验也可以选择过滤除菌，PBS 缓冲液配制灭菌方式根据实验无菌要求选择。

问题 3 PBS 缓冲液配制目标 pH 是多少

回答 1 常规 PBS 缓冲液配制标准目标 pH 是 7.4，PBS 缓冲液配制调 pH 是最核心步骤，pH 偏离会影响细胞和抗原结合。

【免责申明】

本文为实验室常规 PBS 配制参考，特殊实验体系请按照课题专用配方调整，实验操作请遵守实验室安全规范。